Quantifizierung von Protein-Interaktionen mit der QTRAP Technologie von AB Sciex

Ein Wissenschaftlerteam, darunter der Kyoto-Preisträger Tony Pawson, Ph.D., und Nicolas Bisson, PH.D. vom Samuel Lunenfeld Research Institute der Mount Sinai Klinik in Toronto (Ontario, Kanada), hat einen neuen Ansatz zur Proteinquantifizierung entwickelt.

Die Besonderheit dabei ist die Kombination von Affinitätsaufreinigung mit Multiple Reaction Monitoring (MRM) - basierend auf den QTRAP- und Eksigent-Technologien von AB Sciex. Die Methode erlaubt Forschern, Protein-Protein-Wechselwirkungen in ihrem zeitlichen Verlauf zu messen. Vor allem bei Interaktionen, die als Antwort auf bestimmte Zellvorgänge stattfinden (zum Beispiel im Zusammenhang mit Krebs oder anderen schweren Erkrankungen) ist die neue Anwendung von Bedeutung.

Bislang gab es nur wenige Möglichkeiten zur Quantifizierung von Protein-Interaktionen. Besonders bei der Untersuchung von Adapterproteinen, die aktivierte Rezeptoren mit ihren zytoplasmatischen Effektoren verbinden, war es schwierig, quantitative Daten zur Assoziation und Dissoziation der Proteine in Proteinkomplexen zu gewinnen.

Um dieser Herausforderung zu begegnen, arbeitete das Lunenfeld-Institut gemeinsam mit AB SCIEX an einer Methode, die das AB Sciex QTRAP 5500 System in Verbindung mit dem Eksigent NanoLC Ultra + cHiPLC nanoflex liquid chromatography system verwendet. Es entstand eine neue Versuchsanordnung mit der die kanadischen Forscher den zeitlichen Verlauf von Protein-Interaktionen mit dem Adapterprotein GRB2 untersuchen konnten. GRB2 ist ein wichtiger Knotenpunkt von Wachstumsfaktor-Signalwegen. Die Wissenschaftler konnten mit der neuen Affinitäts-MRM-Technik eine große Anzahl von Proteinen identifizieren und deren Dynamik bei der Interaktion quantifizieren. Das Verfahren sowie die Forschungsergebnisse wurden kürzlich online im biomedizinischen Journal Nature Biotechnology vorgestellt.

Nicolas Bisson, D Andrew James, Gordana Ivosev, Stephen A Tate, Ron Bonner, Lorne Taylor & Tony Pawson: Selected reaction monitoring mass spectrometry reveals the dynamics of signaling through the GRB2 adaptor.

Nature Biotechnology 29, 653-658 (2011) doi:10.1038/nbt.1905

 

Jetzt registrieren!

Die neusten Informationen direkt per Newsletter.

To prevent automated spam submissions leave this field empty.